您的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 人乳腺癌細胞MDA-MB-231的傳代步驟是怎樣的?
技術(shù)文章
人乳腺癌細胞MDA-MB-231是一種人乳腺癌細胞系,常用于腫瘤轉(zhuǎn)移和侵襲性的研究。該細胞系來源于一個四級侵襲性乳腺癌患者的異種移植物,在體內(nèi)形成了高度轉(zhuǎn)移和惡性侵襲的表現(xiàn)。
通常在無菌環(huán)境中使用層流罩。培養(yǎng)基的更換與細胞的生長速度密切相關(guān)。如果在6-16小時內(nèi)更換培養(yǎng)基,可以去除殘留的亞甲基楓樹和死細胞??捎糜谶M一步科學(xué)研究,不能用于治療等方面。
血清的類型和質(zhì)量會對人乳腺癌細胞MDA-MB-231的生長產(chǎn)生影響。血清是細胞培養(yǎng)非常重要的營養(yǎng)來源。錯誤使用血清會使細胞無法存活。細胞無法存活的另一個原因是培養(yǎng)基。每個細胞系都有其特定的用途和適應(yīng)的細胞培養(yǎng)基。如果突然使用不同培養(yǎng)條件的培養(yǎng)基,大多數(shù)細胞不能立即適應(yīng)。
1、用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒,將其平躺置于培養(yǎng)箱中進行1-3小時的緩沖,然后置于無菌操作臺,打開瓶口,將其中的培養(yǎng)液去掉,再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),根據(jù)細胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進行換液以及傳代,一般2到3天換一次液;
2、待細胞長滿瓶底面積80%-90%,需要對其進行傳代,傳代比例為1:3到1:6;
3、人乳腺癌細胞MDA-MB-231傳代步驟:將0.25%胰酶-0.53mMEDTA消化液置于37°預(yù)熱,倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,往培養(yǎng)瓶中加入3-5mlPBS,輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2ml預(yù)熱好的胰酶,置于37°孵育消化(第一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察,以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落為最佳消化時間,記錄最佳消化時間,以便于下次消化),消化好后加入3ml培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞,使之*脫落,然后收集細胞懸液,1200rpm離心3min,棄上清,加入*培養(yǎng)基重懸細胞,進行傳代。
MDA-MB-231細胞具有以下特征:
高度轉(zhuǎn)移能力:該細胞系可以從原位腫瘤進入血液或淋巴管道,并在機體其他部位進行遠處轉(zhuǎn)移;
低黏附性:這類腫瘤細胞容易在無血清培養(yǎng)條件下暴發(fā)式擴張,并不容易貼壁死亡;
快速增殖:MDA-MB-231生長快、分裂率高,呈纖錐型或多角形;
藥物耐受性強:經(jīng)過多次化學(xué)治療后,部分患者可能出現(xiàn)藥物耐受情況。
缺少ERα雌激素受體表達,即是TNBC(三陰)(Triple-negative breast cancer)之一。