很多科研小伙伴在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，總是出現(xiàn)各種各樣的情況和問(wèn)題，比如，細(xì)胞漏液、不貼壁、細(xì)胞有黑點(diǎn)、支原體污染、不增殖、細(xì)胞老化變形、復(fù)蘇存活率低等等，這些問(wèn)題對(duì)于參與細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的小伙伴來(lái)說(shuō)，是急需解決的大問(wèn)題，好不容易買來(lái)的細(xì)胞，剛剛進(jìn)行培養(yǎng)傳代，就出現(xiàn)了以上的各種問(wèn)題，這樣的情況通常都會(huì)令小伙伴們無(wú)比抓狂。

因?yàn)橄胍_(kāi)展后續(xù)實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)細(xì)胞往往是關(guān)鍵要事，細(xì)胞養(yǎng)不好，后續(xù)實(shí)驗(yàn)就無(wú)法進(jìn)行。

如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細(xì)胞株老化、復(fù)蘇存活率低等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那么還有一種情況發(fā)生，那就是你的細(xì)胞可能被污染了。所以不管發(fā)生哪種類型的污染情況都會(huì)造成相同的結(jié)果，就是實(shí)驗(yàn)需要重新做，這樣不僅增加了實(shí)驗(yàn)成本，而且又浪費(fèi)工作時(shí)間，還增加了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。

而且以污染細(xì)胞和未污染細(xì)胞為基礎(chǔ)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時(shí)，有可能得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果*不同。更為嚴(yán)重的是，如果你所研究的細(xì)胞是另外一種細(xì)胞的話，那所做的所有工作可能會(huì)一文不值。

那么為什么一定要進(jìn)行支原體污染清除呢？

支原體污染清除要求

從2013年開(kāi)始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細(xì)胞培養(yǎng)都要進(jìn)行支原體檢測(cè)。以細(xì)胞為載體的科學(xué)研究，如果不能保證所用的細(xì)胞無(wú)支原體污染，則實(shí)驗(yàn)結(jié)果很可能是不可靠甚至是*錯(cuò)誤的！

支原體直徑約為0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對(duì)支原體無(wú)效。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為30-60%。

支原體可通過(guò)細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

電鏡下的支原體

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。支原體會(huì)消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。

支原體的危害

支原體清除服務(wù)包括以下幾個(gè)方面：

服務(wù)對(duì)象

1. 實(shí)驗(yàn)室的種子細(xì)胞，如從ATCC、JCRB、DMSZ等國(guó)外專業(yè)細(xì)胞庫(kù)采購(gòu)的珍貴細(xì)胞系；

2. 組織珍貴的原代細(xì)胞；

3. 需要進(jìn)行基因編輯的細(xì)胞；

4. 各類干細(xì)胞（含iPS細(xì)胞）；

5. 稀有細(xì)胞。

服務(wù)內(nèi)容

1.根據(jù)客戶提供的細(xì)胞名稱、細(xì)胞代次、細(xì)胞類型制定細(xì)胞的支原體清除方案；

2. 細(xì)胞STR鑒定（選做）；

3. 支原體PCR法檢測(cè)支原體污染程度；

4. 細(xì)胞的支原體清除，一般污染單一支原體的清除時(shí)間為2周左右，感染多種支原體且非常嚴(yán)重的細(xì)胞，清除時(shí)間需要延長(zhǎng)，約3-4左右；

5. 2-3周后，再次進(jìn)行支原體檢測(cè)，如果細(xì)胞支原體清除干凈，將換為支原體預(yù)防培養(yǎng)方案，繼續(xù)維持一周左右時(shí)間。如未清除干凈，則適當(dāng)延長(zhǎng)1-2周繼續(xù)清除頑固支原體，2周后再次進(jìn)行復(fù)檢。

服務(wù)周期與價(jià)格

送樣要求

1. 復(fù)蘇細(xì)胞（充液運(yùn)輸）：生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞，待達(dá)70%-80%匯合時(shí)，去掉舊培養(yǎng)液換入新培養(yǎng)液，量要達(dá)到培養(yǎng)瓶的頸部（過(guò)滿易污染），保留少許空間，旋緊瓶蓋，避免空氣過(guò)多運(yùn)輸中氣泡運(yùn)動(dòng)易使細(xì)胞脫落。

2. 凍存細(xì)胞（干冰運(yùn)輸）：將干冰提前置于塑料泡沫盒中，以較快的速度將細(xì)胞凍存管從液氮轉(zhuǎn)入干冰中，用膠帶封好泡沫盒，在外面加套一層紙盒，延緩干冰揮發(fā)。

注：根據(jù)距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小于 50mm，內(nèi)部空間不小于200× 200× 200mm，放入足量干冰。

支原體清除案例

如上圖1所示，左側(cè)為支原體污染的MCF-7細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除后的MCF-7細(xì)胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細(xì)胞間隙間黑點(diǎn)明顯減少，細(xì)胞邊緣清晰，狀態(tài)良好。

如上圖2所示，左側(cè)為支原體污染的Hep G2細(xì)胞，右側(cè)為支原體清除試劑處理的Hep G2細(xì)胞。左側(cè)有支原體污染的細(xì)胞樣品可以觀察到細(xì)胞核周圍微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。支原體污染嚴(yán)重的細(xì)胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍(lán)色熒光。右側(cè)細(xì)胞支原體污染被清除干凈，僅觀察到細(xì)胞核的藍(lán)色熒光，證明支原體已被清除干凈。

注意事項(xiàng)

1. 由于各個(gè)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)體系不同，且更換體系細(xì)胞會(huì)需要一段時(shí)間的適應(yīng)，故本服務(wù)需客戶自行提供足量的培養(yǎng)體系；

2. 根據(jù)客戶需求，STR鑒定服務(wù)為選做項(xiàng)目，鏡像綺點(diǎn)生物承諾對(duì)于支原體清除服務(wù)細(xì)胞進(jìn)行單獨(dú)隔離培養(yǎng)，客戶為保證實(shí)驗(yàn)嚴(yán)謹(jǐn)性，可選擇我司進(jìn)行STR鑒定服務(wù)；

3. 由于細(xì)胞隨時(shí)可能會(huì)存在交叉的風(fēng)險(xiǎn)，只認(rèn)可我司接收細(xì)胞后第yi時(shí)間進(jìn)行的STR鑒定結(jié)果；

提供結(jié)果

原始支原體PCR結(jié)果圖片和無(wú)支原體污染的細(xì)胞（根據(jù)客戶需要選擇充復(fù)蘇/凍存發(fā)貨形式）。

保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶提供產(chǎn)品的檢測(cè)信息與數(shù)據(jù)，履行保密義務(wù)，未經(jīng)客戶許可，不得擅自公開(kāi)發(fā)表或使用，不得泄露給第三方。

支原體清除試劑

另外，鏡像綺點(diǎn)還提供可有效抑制并清除多種支原體的支原體清除劑，包括 Mycoplasma orale, M. arginini, M. hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證對(duì)細(xì)胞幾乎沒(méi)有毒性，對(duì)細(xì)胞的各種檢測(cè)沒(méi)有干擾。通常在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入本試劑約1至2周即可有效抑制和清除支原體。

iCell支原體清除劑為透明淡黃色液體。具體的工作濃度因支原體的種類不同而有所不同，在實(shí)際防止支原體污染或清除支原體污染時(shí)需摸索適當(dāng)?shù)墓ぷ鳚舛取?/p>

支原體清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)細(xì)胞無(wú)害，對(duì)清除支原體污染*，能夠很好的抑制和殺滅支原體。

所以，科研小伙伴們?nèi)绻銈兪掷镎滟F的細(xì)胞被支原體污染了，沒(méi)有辦法做實(shí)驗(yàn)，沒(méi)有其他地方采購(gòu)，千萬(wàn)不要扔掉，交給我們，相信我們，我們會(huì)還你一個(gè)狀態(tài)好又無(wú)污染的好細(xì)胞，而且我們保證，不成功不收費(fèi)的哦~~~